Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы

Основные отличия методов ПЦР и ИФА

Содержание:

Каждый тест имеет свои плюсы и недостатки для определения заболевания. Они подходят для определения как хламидии, так и уреаплазмы. А также имеются общие требования для прохождения тестов. Когда необходимо проходить лабораторные исследования биоматериалов? Можно указать рядовые случаи, которые приводят к врачу и требуют сдавать анализы:

  • Если пара планирует беременность или имеет неудачные её попытки. При внезапных выкидышах у беременных. Бесплодие у женщин. Исследуют на хламидии и уреаплазму.
  • Снижение потенции у мужчин, специфические выделения из уретры, воспаление мочеполовой системы, простатит.
  • Воспаления во влагалище у женщин, матки, яичников. Выделения, зуд и жжение, цистит и боли внизу живота, уретрит.
  • Незащищенные половые контакты.
  • Недомогания у детей, если родители уже болели хламидиозом в основном это касается женщин.
  • Наличие крови в моче или сперме.
  • Недомогания в лёгких: непрекращающийся кашель. При контактах с заболевшими пневмонией.

Распространенными методами диагностики заболеваний, передающихся через половые контакты стали мазок, метод ПЦР, ИФА и РИФ.

Метод ПЦР

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
Исследование ПЦР (полимеразная цепная реакция) в отличие от ИФА (имунноферментный анализ) является самым точным методом определения инфекций в организме не требующий специальной подготовки. Достоинство заключается в возможности диагностировать увеличенный участок ДНК возбудителей до нескольких сотен раз. Точность, предоставляемая этим методом, позволяет обнаружить в исследуемом биоматериале одиночную ДНК.

При проведении процесса исследования по необходимым правилам позволит избежать ошибок и ложноположительных показаний. Если какой-нибудь анализ на хламидии даст положительный результат, то необходим второй способ исследования для подтверждения показаний и определения вида инфекции. Отрицательный тест будет свидетельством отсутствия инфекции.

Распространённая область проведения ПЦР приходится на выявление возбудителей заболеваний, передающихся при половых контактах. Проведение диагностики по симптомам может быть рационально только при продолжительном присутствии хламидий в организме человека. В первые месяцы заражения болезнь проходит бессимптомно. Методом цепной реакции можно выявить болезнь в первый же день и вовремя пройти лечение. Многие люди не обращаются за помощью, приняв решение бороться с проблемами в одиночку.

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
Заболевание прогрессирует, потому как не определен главный виновник недомогания. Используемые препараты лишь приглушают симптомы на время, которые спустя несколько лет приводят к серьёзным заболеваниям. Прогрессирует хламидиоз в периоды ослабления организма: простуды, при стрессах, отравлениях и др. На без того нелёгкое положение, вызванное такой ситуацией, накладывается ещё и хламидиоз. Организм ослабляется вдвойне и вырастает шанс получить неизлечимое заболевание.

Исследование методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
Для диагностики этим методом берут анализ крови пациента, мочи или мокроты. Для проведения исследований половых инфекций хламидии и уреаплазмы берут анализ соскобов уретры как у женщин, так и у мужчин. Мазок берут иногда из цервикального канала. Эти анализы проводят по истечении суток после полового контакта. Преимущество способа ПЦР заключается в возможности выявления скрытых инфекций с большой точность 90–95%. Он проводится в качестве подтверждения уже сданных анализов.

Методом ПЦР пользуются для установления вида возбудителя не только хламидиоза, но и других микроорганизмов: ВИЧ, гепатита, туберкулёза и желудочно-кишечных инфекций, папилломы, герпеса. При проведении анализа ПЦР подготовка организма аналогична взятию крови из вены. В расшифровке анализа указывают два варианта отрицательно или положительно:

  • Отрицательный результат показывает, что в биоматериале антител к возбудителю не обнаружено и можно с уверенностью сказать: «заражения не произошло». Но если не прошли ещё сутки после появления хламидий антитела могут не успеть выработаться и отрицательный анализ будет ошибочным. Поэтому проводят дополнительный способ исследований.
  • Положительный указывает на присутствие инфекции. Показывает какой именно тип обнаружен.

Метод ПЦР позволяет с высокой точностью определить наличие инфекций и вид микроорганизма. Позволяет избежать ложноположительных и ложноотрицательных результатов. И если способом ИФА микроорганизмов может быть не обнаружен, то полимеразной цепной реакцией будет выявлено.

Метод ИФА

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
Этот способ исследования основан на количественном подсчете антител возбудителей в биоматериале и сравнение результата с нормой. Не требует сложной аппаратуры и радиоактивных соединений, поэтому метод относят к экономичным. Безопасность и простота ИФА послужила наибольшим распространением при исследовании биоматериалов на хламидии.

Преимуществом метода является возможность определения стадии заболевания, которую определяют виды антител IgM, IgA и IgG. Полученные отрицательные значения одного вида хламидий и положительных других определяют 4 стадии болезни: острую IgM, прогрессирующая IgA, хроническая IgG и этап выздоровления IgG+IgM.

Рассмотрим количественные соотношения антител IgA, IgM и IgG при разных стадиях заболевания:

  • При значениях близких к норме делают выводы, что антитела находятся в пределах, не угрожающих здоровью.
  • Полное отсутствие инфекции укажет результат отрицательно на все Ig и иммунитет к микроорганизмам отсутствует.
  • Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
    Если при положительном анализе выявлен основной вид антител IgG, указывающий на то, что инфекция была в организме или повторно появилась.

Повторный анализ проводят на определение класса IgG. При выявлении IgG и отсутствии IgM_IgA — делают вывод о наличии иммунитета к хламидиям. Обнаружено IgM, а IgG_IgA отрицательно — наблюдается обострение заболевания. Положительные значения всех трех классов IgM_IgA_IgG — говорит о хроническом протекании инфекции. Антитела IgG могут оставаться в организме в течение нескольких лет. Рассмотрели возможную расшифровку результата метода ИФА крови на хламидии.

Применяют ИФА для определения не только хламидиоза, но и следующих видов:

  • определение аллергий различного вида;
  • диагностирование иммунодефицита;
  • определение всех видов инфекций;
  • для обнаружения вирусов.

Преимущества и недостатки методов анализа на хламидии

Отличительные черты ПЦР и ИФА:

  • Первый способ дорогостоящий и требует сложной аппаратуры.
  • Второй требует навыков проведения исследования.
  • ИФА дает количественную оценку результата и сравнение его с нормой.
  • ПЦР самый точный метод.
  • Первый требует длительного ожидания результата анализа.
  • ИФА имеет возможность ложноотрицательных или ложноположительных показаний, а ПЦР этого недостатка лишён.

В чём опасность самостоятельного лечения хламидиоза?

Длительное присутствие хламидий в организме существенно подрывает здоровье человека:

  • Возможны проявления иммунных осложнений.
  • Возрастает вероятность приобрести аллергические реакции на обычные вещи.
  • Распространены случаи заболеваний склерозом или болезнью Крона.
  • Возможен переход полового хламидиоза в бытовое заражение. При таком исходе близкие люди могут заразиться воздушно-капельным путём. Он переходит на глаза и легкие и результат его действия приводит к бронхиальной астме и конъюнктивиту.
  • Недомогание охватывает весь организм. Снижается общий тонус, появляется повышенная потливость, наблюдаются высыпания на коже в различных частях тела. Человек пытается лечить видимые проблемы, а необходимо лечение хламидиоза.
  • Постоянный насморк и температура служат признаком снижения иммунитета. Провериться на хламидии просто необходимо.
  • Наблюдается через несколько недель хламидиоза развитие синдрома Рейтера. Симптомы этого недуга заключаются в раздражении глаз, боли при мочеиспускании и болевые ощущения в суставах.

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы
Хламидиоз особо опасен у женщин при беременности. Самолечение в таком состоянии преступно, ведь снижение иммунных возможностей организма грозит прерыванием беременности. Плод развивается с отклонениями и ребёнок может родиться недоразвитым или раньше срока. Лечение антибиотиками не проводят в начальные месяцы, когда плод ещё формируется. В это время женщина испытывает дополнительные нагрузки и ребёнок недополучает полезные вещества.

Поэтому рекомендуется перед планированием беременности пройти полное обследование на инфекции обоим партнёрам и при необходимости пройти лечение. Заражение плода возможно только через кровь и происходит во время родов. Для лечения во время беременности назначают препараты в составе которых имеется азитромицин. К таким относятся Сумамед или российский аналог Азитрокс и Азитромицин.

Симптоматика и признаки хламидиоза у женщин и мужчин

Исследования, проводимые методикой ПЦР, делают с целью диагностирования инфекций, провоцирующих следующие вирусы, как микоплазма, уреаплазма, хламидии и прочие. Для обследования наличия хламидиоза и прочих инфекционных заболеваний, нужно сдавать кровь на анализы, мазки на бактериологический посев либо соскоб.

Если сдать мазок на посев либо соскоб, то хламидиоз, как наиболее коварное заболевание, передающееся при половых контактах, может не обнаружиться. Ведь атипичные бактерии, как хламидии, размножаются и концентрируются внутри иных клеток организма. Именно потому, такое заболевание, как хламидиоз (и уреаплазма), практически не идентифицируется при исследованиях в рамках привычных анализов.

Период инкубационного развития хламидий до определения выраженной симптоматики длится до 3-х недель. Именно за это время инфекция успевает встроиться в клетку организма, как у мужчин, так и у женщин. Диагностика ПЦР позволяет раньше выявить вирус и не дать распространится такому возбудителю, как уреаплазма.

Когда болезнью уже захвачен организм, проявляется следующая симптоматика у мужчин:

  • это моча мутного цвета;
  • утренние выделения из мочеиспускательного канала;
  • зуд и признаки жжения при мочеиспускании;
  • общее состояние слабости с повышением температуры тела;
  • выделения с кровянистыми примесями при мочеиспускании и даже наблюдается такое, как кровянистое семяизвержение.

Признаки заболевания хламидиозом у женщин это:

  • присутствие неприятного запаха гениталий;
  • желтоватые выделения слизистого состава из влагалища;
  • зуд и неприятное жжение в процессе мочеиспускания;
  • слабость самочувствия с незначительным повышением температуры.

Такие возбудители инфекций, как хламидии и уреаплазма, являются опасными, поскольку могут выказывать слабую симптоматику для обнаружения, а со временем исчезать. Запущенная форма деятельности в организме возбудителей, как хламидии и уреаплазма, приводит к поражению внутренних органов, как у мужчин, так и у женщин.

Как делают анализ ПЦР на хламидии?

Для диагностики хламидиоза используют целый комплекс лабораторных исследований, самым важным из которых является анализ ПЦР. Метод полимеразной цепной реакции с высокой точностью обнаруживает наличие в организме хламидий на основе исследования ДНК клеток биологического материала.

Метод ПЦР выявляет не только активно размножающиеся в острой стадии заболевания хламидии трихоматис, но и скрытый хронический хламидиоз.

Читайте также:  Офлоксацин при аднексите как принимать

Как берут мазок ПЦР на хламидии?

На исследование часто берут венозную кровь пациента, но чаще всего в женских консультациях практикуют забор отделяемого из половых путей. Анализ сдают не ранее, чем через 3 дня после окончания менструации. Материал на анализ забирают в виде мазка из влагалища, уретры, шейки матки. После проведения соскоба у женщины может отмечаться болезненность при мочеиспускании, допустимы небольшие кровянистые выделения.

Как проводиться анализ, расшифровка показателей

ИФА и ПЦР на хламидии

Заболевания, что передаются половым путем, по частоте случаев можно сравнить разве что с простудой и гриппом. Среди них самыми опасными считаются инфекционные заболевания, так как они распространяются среди населения в геометрической прогрессии, а также требуют долгого трудоемкого лечения. Хламидиоз — яркий представитель такой группы инфекций, причем диагностировать наличие такой патогенной флоры достаточно сложно.

загрузка…

Современная медицина разработала множество новейших методик диагностирования инфекций, условно-патогенной флоры и вирусов. ИФА и ПЦР — наиболее востребованные процедуры сегодня благодаря своим максимально точным результатам обследований. Несмотря на это если после проведения анализа был получен положительный ответ, это не является подтверждением хламидиоза.

ПЦР на хламидии

Диагностировать хламидиоз у пациента однозначно практически невозможно, даже если ИФА или ПЦР выявил хламидии. По статистике, в большинстве случаев анализы на хламидии дают неверные результаты, а специалист может поставить неверный диагноз. Исследования на полимерную цепную реакцию — это самый точный метод выявления инфекции, к которому пациенту не нужно готовиться.фото 1

Преимуществом ПЦР является то, что такое обследование позволяет изучить увеличенный ДНК участок множество раз (до нескольких десятков-сотен раз). Кроме того отличается процент точности в расшифровке, так как в биоматериале пациента специалист может изучать одиночную ДНК. Как правило, если другие методы диагностики подтверждают наличие хламидиоза, возбудителем которого является хламидия трахоматис, анализ ПЦР кровь или мазок нужно брать для подтверждения или опровержения этого.

Для справки! Такая методика лучше ИФА тем, что выявить можно даже такое заболевание, которое имеет скрытую или вялотекущую форму.

ПЦР применим для поиска следующих болезней:

  • урогенитальные инфекции;
  • гепатит;
  • туберкулез;
  • папиллома вирус человека;
  • дифтерия;
  • сальмонеллез;
  • ВИЧ;
  • хеликобактериоз.

Несмотря на высокие показатели точности, у ПЦР анализа могут случаться погрешности, так как результаты обследования касаются только клеточного материала, который брался для процедуры. Определить точную скорость развития хламидиоза можно не всегда со 100% точностью.

ИФА на хламидии

Анализ ИФА или иммуноферментный анализ — это относительно новый метод диагностики, который предполагает рассмотрение избирательной реакции антигенов и антител, то есть специфических иммунологических реакций. Для этого проводится анализ крови, благодаря такому биоматериалу можно выявить возбудителя инфекции.фото 2

загрузка…

Назначения для ИФА:

  • ВИЧ;
  • сифилис;
  • уреаплазма, микоплазма и хламидии;
  • гепатит;
  • герпес;
  • цитомегаловирус.

Такой метод обследования используют также для определения баланса гормонов, наличие инфекционных возбудителей, а также онкологические новообразования. Минусом такого способа обследования можно считать то, что наличие антител может не только говорить о присутствии заболевания, но и про недавний контакт с возбудителем. Преимуществом является способность выявления заболеваний, что не отражаются иммунной системой -микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз (у мужчин, у женщин). Какие анализы нужно сдавать при трихомониазе, можно узнать в отдельной статье.

Для справки! ИФА отличается от ПЦР тем, что полученные результаты ИФА анализа не являются первичными данными.

Расшифровка результатов и нормы

Проведение ПЦР на хламидии по моче, мокроте или крови пациента может предполагать также взятие соскобов уретры (реже из цервикального канала), которые как берут у женщин, так и мужчин. Проводить анализ можно по прошествии хотя бы суток после последнего полового акта.

Расшифровка анализов ПЦР имеет только два варианта:

  1. Положительный — ПЦР выявил хламидии, а значит, присутствие инфекции тоже и ее тип.
  2. Отрицательный — отсутствие антител в биоматериале говорит об отсутствии заражения. Но если анализ проводили меньше 24 часов после полового акта, организм мог просто не выработать еще антител.

Перед сдачей ПЦР на поиск хламидий, специалист должен оговорить тонкости, как сдавать женщинам и мужчинам такое анализ, чтобы получить очные результаты.фото 2

При исследовании, чаще всего ИФА анализ востребован за счет безопасности и легкости проведения. В крови пациента выявляют антитела IgM, IgA и IgG, которые покажут вид возбудителя и стадию развития инфекции. Если специалист установил отрицательный ответ на один вид хламидий, положительный к другому виду, можно говорить о таких стадиях инфекции:

  • IgM — острое течение;
  • IgA — прогрессирующее течение;
  • IgG — хроническая инфекция;
  • IgG+IgM — иммунитет справляется с инфекцией, а значит, пациент находится на стадии выздоровления.

Учитываются также соотношения количественные между найденными антителами:

“Это невероятно!”

От любых паразитов можно избавиться дома! Просто 1 раз в день нужно пить…

>

  • показатели в пределах нормы говорят об отсутствии угрозы;
  • отрицательно на все Ig говорит об отсутствии инфекции, а значит, и иммунитета к таким возбудителям;
  • положительно на IgG говорит о заражении в прошлом и наличии вторично развитой инфекции сейчас.

После прохождения лечения пациенту обязательно нужно сдать ИФА анализ повторно, после чего в крови могу быть выявлены следующие результаты и расшифровка:

  • IgM_IgA «-» и IgG «+» — наличие иммунитета к хламидиозу;
  • IgG_IgA «-» и IgM «-» — острая фаза инфекции;
  • IgM_IgA_IgG «+» — инфекция перешла в хроническую форму.

По мнению большинства специалистов, для получения большей картины происходящего внутри организма лучше прибегнуть к обоим способам диагностики.фото 5

Почему разнятся результаты?

При определенных обстоятельствах полученные результаты анализа ПЦР и иммуноферментного анализа могут не совпадать. Этому способствуют следующие причины:

  1. ИФА обычно является таким себе «следом», оставленным инфекцией. Если ПЦР не обнаружил ДНК хламидиоза, ИФА анализ может еще проявляться оставленный «след» перенесенной ранее инфекции.
  2. Есть, также, существенная разница в используемом оборудовании. Если ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, это является следствием работы тест-систем, которые могу находить самые труднодиагностируемые бактерии и микробы. ПЦР, например, может выявить возбудителя хламидия трахоматис, в то время как ИФА все существующие виды.
  3. Есть разница в исследуемом биоматериале. ПЦР берут анализ из места, где предположительно концентрируется инфекция. Для ИФА не никакой разницы в месте расположения возбудителя. В этом случае иммуноферментный анализ показывает более точные данные.
  4. Еще одна причина — хроническая стадия хламидиоза, когда положительный ответ дает ПЦР, а ИФА отрицательный. Такое бывает из-за уставшей бороться иммунной системы, а также в случае свежего инфицирования, когда еще не вырабатываются антитела.

Оба варианта обследования нельзя заменить другими способами диагностики, а выносить точный диагноз можно только при комплексной оценке полученных результатов ПЦР и ИФА.

Что такое ПЦР?

Механизм исследования заключается в следующем. В образцах пациента ищут и выделяют фрагменты РНК и ДНК патогенных бактерий, на наличие которых берется анализ.

После добавления специальных реагентов эти участки, вступая с ними в полимеразную реакцию, начинают с большой скоростью увеличиваться, как в размере, так и в количестве.

Далее приходит очередь ферментов, так называемых аналитических маркеров, которые помогают обнаружить разросшиеся фрагменты. Конечно, если последние имеются.

Как сдавать такой анализ? Наиболее информативными будут образцы, взятые из непосредственных очагов инфекционного заражения.

Мазок на хламидии методом ПЦР чаще всего подразумевает забор материала из следующих мест:

  • секрет простаты;
  • уретра;
  • шейка матки;
  • влагалище.

В качестве материала для исследования могут использоваться кровь, моча и сперма.

Это совершенно безболезненная процедура, не требующая какой-либо серьезной подготовки.

Через 2-3 суток пациент может получить достоверные сведения о наличии или отсутствии в его организме бактерий, вызывающих хламидиоз.

Точность анализа позволяет определить наличие даже самого незначительного количества бактерий в образцах.

Исследование крови

Показания к назначению

Чаще всего ПЦР на хламидии назначается при следующих ситуациях:

  • при вынашивании ребенка;
  • в случае диагностирования заражения хламидиями полового партнера;
  • при бесплодии неизвестной причины;
  • при выраженной хламидийной симптоматике.

В последнее время во всех учреждениях, наблюдающих беременных женщин, рекомендуется обязательно сдавать анализ на хламидии методом ПЦР. Это обуславливается тем, что хламидиоз коварное и опасное заболевание.

При бессимптомном течении оно может передаваться плоду вертикальным путем, то есть через плаценту, либо непосредственно вовремя родов при прохождении ребенком родовых путей. Мать заражает ребенка не зная об этом.

Врожденный хламидиоз чреват серьезными патологиями в первые месяцы жизни и переходе заболевания в хроническую форму с острыми рецидивами.

Способен хламидиоз привести и к преждевременным родам.

При обнаружении в образцах будущей матери патогенного микроорганизма, женщине назначается лечение. Его основой станет использование антибактериальных средств — антибиотиков, безопасных и для будущей роженицы, и для еще не родившегося ребенка.

Забор крови из вены

Статьи по теме:

  • Анализ на токсокароз: виды исследований и их расшифровка

  • Анализ на токсоплазмоз: как сдавать и расшифровка результатов

  • Соскоб на энтеробиоз: как правильно сдать анализ?

  • Антитела к аскаридам – что это такое: норма и расшифровка

  • Анализ кала на яйца глист – как сдавать и сколько ждать?

Подготовка к исследованию

Особых подготовлений к процедуре не потребуется. Но есть ряд предписаний, выполнение которых обязательно перед забором образца. Это позволит получить максимально достоверный результат.

Среди них:

  • перед сдачей анализа необходимо ограничить половою жизнь (минимум 3 недели);
  • за месяц до забора образца нужно прекратить прием любых антибиотиков, способных каким-либо образом повлиять на хламидии;
  • в день процедуры категорически не рекомендуется использование антибактериальных средств при гигиенических процедурах, особенно в области половых органов;
  • за неделю до сдачи образца нужно прекратить использование любых местных препаратов, обладающих антибактериальным средством (свечи, крема, растворы для спринцевания).

Запрещен забор материала во время менструации.

Анализ мочи и крови

При необходимости исследования методом ПЦР крови, правила подготовки включают следующее:

  • после пробуждения и до сдачи образца для исследования, запрещено употребление любой пищи, жидкости и даже использование жевательной резинки;
  • за день до анализа необходимо разгрузить ЖКТ, употребляя исключительно постную пищу;
  • если прием лекарственных препаратов не является жизненно необходимым курсом, следует ограничить прием любых медикаментов за сутки до анализа.

Анализ мочи на полимеразную цепную реакцию требует соблюдения следующих рекомендаций:

  • для исследования нужен первый утренний образец;
  • материал следует поместить в герметичный контейнер, который можно приобрести в любой аптеке;
  • перед сбором образца тщательно подмываются наружные половые органы;
  • чтобы избежать смешивания материала с выделениями из влагалища, женщинам следует прикрыть его ватным тампоном на время сбора.

При несоблюдении этих предписаний велика вероятность получения ложноотрицательного или ложноположительного результата.

Это может повлечь за собой либо необходимость повторной сдачи анализа, либо возможность назначения неверного курса лечения, со всеми вытекающими последствиями.

Расшифровка результатов

Общие выводы из полученных результатов после сдачи анализа может сделать и человек не обладающий специальными знаниями. Но составить верную схему лечения, если оно необходимо, может исключительно специалист.

Расшифровка анализов

При «отрицательном» результате можно говорить о полном отсутствии хламидий в организме человека. В таком случае причину недомогания (если пациента что-то беспокоит) следует искать в ином.

Но при наличии явной симптоматики хламидиоза и «отрицательном» результате анализа следует использовать иные методы диагностики или пересмотреть мнение о компетенции лабораторного учреждения, проводившего исследование.

Анализ со знаком «+» подтверждает опасения — в организме присутствуют бактерии-возбудители хламидиоза. Но это не всегда означает наличие самого заболевания, так как хламидии присутствуют в организмах почти 60% здоровых людей.

Они могут активизироваться при наступлении благоприятных условий. Это означает что особой внимание следует уделять профилактике заболевания.

Количественная характеристика представителей патогенной микрофлоры определяется с помощью иных методов диагностики, например, культуральный анализ (бакпосев).

Недостатки методики

Как и любые методы исследования, мазок ПЦР на хламидии имеет и минусы.

Лабораторная пробирка

Среди них:

  1. Стоимость «выше среднего». Методика подразумевает использование дорогостоящих реагентов и оборудования, что, естественно, отражается и на цене анализа. По этой причине этот метод диагностики доступен только в частных медицинских учреждениях.
  2. С помощью ПЦР практически невозможно определить активность хламидий на ранних этапах течения болезни. Использование методики целесообразно только при наличии воспалительного процесса, вызванного деятельностью патогенной микрофлоры.
  3. Жесткие условия в период перед сдачей анализа. При их несоблюдении нередкость появление ложноположительного или ложноотрицательного результата, что увеличивает стоимость обследование, так как требуется дополнительные процедуры.

что такое ПЦР?

Любая живая клетка – будь то вирус или бактерия, имеет ядро с содержащимися в нем молекулами ДНК и РНК. Соединения данного типа для каждого микроорганизма уникальны, поэтому их выделение в исследуемом материале помогает врачу определить вид инфекции и поставить абсолютно точный диагноз. Но обнаружить ДНК вируса в биологических образцах непросто из-за низкой концентрации этих молекул в анализируемом веществе, поэтому обычные диагностические методики в данном случае не действуют.

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) была создана именно с целью устранения этой проблемы. Исследование предполагает особую обработку биоматериала, которая направлена на увеличение в нем количества ДНК возбудителя. Такой прием дает возможность определить вид инфекции и установить возбудителя болезни. В дальнейшем, на основании ПЦР врач сможет быстро поставить правильный диагноз и начать соответствующее лечение пациента.

Преимущества метода

Существует множество различных тестов и анализов, применяемых с целью определения венерических заболеваний. Если сравнивать их с данной методикой, можно отметить следующие преимущества полимеразной цепной реакции:

  • повышенная чувствительность – это свойство позволяет точно установить тип инфекции (микоплазмы, хламидии, уреаплазмы) как в острую, так и в хроническую стадию течения болезни;
  • быстрый результат – обследование ПЦР на хламидии выполняется в сжатые сроки;
  • специфичность – своеобразие этого способа диагностики помогает более внимательно изучить анализируемый материал.

Важно! Если исследование проводиться в острый период заболевания, ПЦР определяет даже минимальные количества хламидийной инфекции, присутствующие в организме больного.

Даже в хроническую стадию патологии, когда выделить возбудителя из биоматериала достаточно трудно, метод полимеразной цепной реакции прекрасно справляется с поставленной задачей.

С чем связаны недостатки этого анализа?

Хоть данный анализ является высокоинформативным и точным способом выявления инфекции, он также имеет свои недостатки. Поскольку ПЦР – это современное и специфическое исследование биоматериала, необходимо соблюдать определенные условия во время его проведения. Лаборатория, в которой выполняется этот метод диагностики, должна быть оснащена биологическими фильтрами, очищающими воздух в помещении. Такие меры предосторожности не дают различным микроорганизмам, присутствующим в окружающей среде, попасть в исследуемый образец. Ведь если кровь или другая биологическая жидкость загрязниться в процессе приготовления к данной процедуре – результаты обследования могут быть ложными.

Полимеразную цепную реакцию не всегда можно трактовать, как предельно точную диагностическую методику. Положительные или отрицательные результаты тестирования зависят от многих факторов. На исход этого исследования влияет не только качество анализируемого образца, но и стадия болезни.

В некоторых случаях ПЦР крови на хламидии может дать отрицательный ответ, даже если клинические симптомы патологии отчетливо указывают на наличие данной инфекции. В подобной ситуации причиной ошибки считают неудачный выбор образца биологического материала. Именно поэтому анализ ДНК на хламидии должен брать квалифицированный специалист в соответствии с инструкцией, которую предоставляет ему лаборатория.

Особенности проведения анализа

Достоверность результатов метода полимеразной реакции зависит не только от безупречной техники забора биоматериала, но и от качества подготовки самого пациента. Сдавая анализ крови или другого исследуемого биологического вещества на ПЦР, рекомендуется соблюдать такие правила:

  • отменить прием антибактериальных лекарств на данный период;
  • полностью исключить половую жизнь за 2-3 недели до проведения обследования;
  • кровь на хламидии следует сдавать утром и натощак;
  • диагностику желательно выполнять в период обострения заболевания;
  • перед забором урогенитального мазка запрещается спринцевание исследуемой области;
  • нельзя проводить ПЦР во время менструации у женщин (разрешается только на 2-3 день после месячных);
  • образец мочи на хламидии берут утром, в стерильную посуду.

Не рекомендуется перед сдачей урогенитального мазка на полимеразную цепную реакцию посещать уборную за 3 часа до исследования. Накануне выполнения анализа, определяющего наличие хламидий и других инфекций в организме, следует воздержаться от похода в баню или сауну. Перед забором образцов биоматериала на ПЦР у мужчин или женщин, врач подробно сообщит пациенту о правилах такой диагностики и сути ее проведения.

Показания для проведения, результаты обследования

Полимеразную цепную реакцию используют в медицине с целью выявления возбудителя — основной причины возникновения заболевания у женщин и мужчин. В частности, ПЦР позволяет установить правильный диагноз в тех случаях, когда клинические симптомы недуга сомнительные или стертые. Показаниями для выполнения такого анализа является:

  • Наличие венерических и других болезней (туберкулеза, сифилиса, герпеса, ВИЧ или СПИДа, различных паппиломавирусов, гепатитов).
  • Генетические патологии (если требуется узнать риск развития каких-либо отклонений у ребенка).
  • Отсутствие подобных обследований (человек ни разу не проходил данный анализ).
  • Воспалительные реакции организма (когда не удается установить причину их проявления).
  • Наличие незащищенных сексуальных контактов в ближайшее время.
  • Планирование беременности или ее осложнения (исследование проходит и мужчина, и женщина).
  • При невозможности оплодотворения (определение первопричины бесплодия у обоих партнеров).
  • Установление особой чувствительности к антибактериальным средствам.

Расшифровывает результаты этой диагностической методики квалифицированный врач. Некоторые лаборатории представляют отчет об исследовании в традиционном виде, при котором не требуется пояснение – «положительно» либо «отрицательно».

Результат обследования ПЦР на хламидии готовиться на протяжении 1-3 суток. В некоторых учреждениях существует срочный анализ, который предоставляется платно. Заключение пациент получает «на руки» в течение 2-3 часов после выполнения диагностики. Только в случае с бактериологическим посевом материала, на проведение исследования требуется от 5 до 6-7 дней.

Интересно! Кроме медицины, методику полимеразной цепной реакции используют в своей работе криминалисты для определения владельца биоматериала, обнаруженного на месте преступления. Также этот способ диагностики применяется с целью установления отцовства.

Какие еще есть исследования?

Существует не так много методов, определяющих наличие хламидий в организме. Материалом для такого анализа может служить мазок, кровь или моча – все зависит от целей обследования. Далее поговорим о том, какие же виды лабораторной диагностики различают, в чем суть каждого из них.

Точные анализы ПЦР и ИФА: расшифровка количественных результатов, подготовка к анализам, искажающие факторы

  • Цистоскопия. Для ее выполнения требуется образец цервикальной слизи (у женщин) либо мазок из уретрального канала (у мужчин). Биологические жидкости равномерно наносят на предметные стекла, а затем исследуют с помощью микроскопа. В анализируемом материале определяют особые клеточные включения, которые могут свидетельствовать о наличии хламидийной инфекции. Такая методика дает очень точные результаты, но применять ее можно только в остром периоде болезни. Хроническая форма патологии не сопровождается появлением клеток-включений, поэтому в данном случае цистоскопия не даст никакого эффекта.
  • Экспресс-тестирование. Подобный анализ проводиться пациентом самостоятельно с помощью специального теста, который приобретается в аптеке. В качестве биоматериала используют мочу либо мазок из цервикального канала (у женщин). Образец наносят на кассету в соответствии с инструкцией и наблюдают за появлением полос. Экспресс-тест определяет наличие специфического антигена (липополисахарида). Данный вид исследования показывает правильный результат в одном случае из 5, поэтому его нельзя считать достоверным диагностическим методом.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА). Суть этого обследования заключается в поиске особых антигенов инфекции в крови пациента. ИФА позволяет провести качественную диагностику болезни, определить характеристики возбудителя, выяснить стадию недуга. Методика обладает невысокой точностью – около 60%. Подобный анализ назначается в том случае, когда врач подозревает инфекционное заболевание, при бесплодии невыясненного генеза.

1. Введение

Более подробно о хламидиях трахоматис (Chlamydia trachomatis) и путях заражения можно узнать в этой статье (перейдите по внутренней ссылке). А здесь мы подробнее остановимся на методах диагностики мочеполового хламидиоза и расшифровке возможных результатов анализов.

Самой первой серологической пробой, внедренной для подтверждения диагноза “урогенитальный хламидиоз”, была реакция связывания комплемента (сокращенно РСК). Проба быстро утратила свою актуальность из-за высокой частоты ложноположительных результатов.

На протяжении двух десятков лет одним из самых информативных способов диагностики урогенитального хламидиоза считался метод прямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител. На фоне вышеперечисленных методов он отличался несколько более высокими показателями специфичности и чувствительности. Вместе с тем, метод требовал обеспечения лаборатории дорогостоящим оборудованием и реагентами.

Еще один метод, актуальный и по сей день, – выявление хламидий в культуре клеток. Этот метод будет описан ниже.

Так или иначе, сейчас повсеместно распространен другой анализ на хламидии – исследование отделяемого или соскоба из уретры, влагалища или цервикального канала методом ПЦР.

Согласно Федеральным клиническим рекомендациям, для диагностики мочеполового хламидиоза могут использоваться:

  1. 1ПЦР-диагностика. Федеральными и Европейскими клиническими протоколами для диагностики урогенитального хламидиоза рекомендован метод амплификации ДНК. В отношении первичного выявления инфекции его специфичность равна 100%, чувствительность 98-100% (уровень доказательности А, уровень обоснованности I).
  2. 2NASBA (метод амплификации РНК).
  3. 3Выделение хламидий в культуре клеток.
  4. 4Цитологический метод. Этот метод исследования мазка малоинформативен при диагностике мочеполового хламидиоза (специфичность 10-12%): есть небольшая вероятность обнаружения внутриклеточных включений – так называемых телец Гальбершетдера-Провачека. Помимо этого, при микроскопии проводится подсчет числа лейкоцитов (увеличение их количества – доказательство воспалительного процесса), а также исследование флоры и обнаружение дрожжеподобных грибков.
  5. 5Серологические тесты.
  6. 6Последние три метода (3,4,5) могут применяться только в определенных ситуациях, когда недоступны методы амплификации ДНК и РНК (ПЦР и NASBA).

Анализы на хламидии назначаются:

  1. 1Скрининг  половых инфекций при беременности и предгравидарная подготовка.
  2. 2Желательно ежегодно сдавать анализы женщинам и мужчинам в возрасте до 25 -30 лет, а также лицам, не имеющим постоянных партнеров на протяжении последнего года или недавно сменившим партнера.
  3. 3Лицам, имеющим симптомы уретрита, вагинита, цервицита.
  4. 4Женщинам с ВЗОМТ (сальпингоофорит, эндометрит и так далее).
  5. 5При обнаружении у пациента любой другой половой инфекции.
  6. 6Мужчинам молодого возраста с воспалением придатков яичка и орхитом.
  7. 7При подготовке к внутриматочному вмешательству.
  8. 8При пневмонии и гнойном конъюнктивите у новорожденного.

Пути передачи, симптомы и виды анализов при хламидиозе у женщин и мужчин
Пути передачи, симптомы и виды анализов при хламидиозе у женщин и мужчин

2. ПЦР на Chlamydia trachomatis

Суть метода ПЦР – обнаружение генетического материала (ДНК) в исследуемом образце и его достраивание путем добавления «строительного» материала (дезоксинуклеорибофосфатов). В результате цепь ДНК удлиняется, ее обнаружение становится возможным с помощью электрофореза и/или флюоресценции.

Все манипуляции выполняются в специальном приборе – амплификаторе, который самостоятельно контролирует смену температур и протекающих фаз соответственно числу необходимых циклов амплификации.

ПЦР позволяет обнаружить хламидии уже через 3 дня после заражения, при высоком риске исследование повторяют через 2 недели после предполагаемого инфицирования.

В настоящее время набирает большую популярность ПЦР-диагностика в режиме реального времени (у женщин этот тест называется Фемофлор). С его помощью исследуется и качественная, и количественная характеристика влагалищной микрофлоры.

ПЦР в режиме реального времени характеризуется короткими сроками выполнения, высокой специфичностью и чувствительностью (порядка 88-90%).

Но для подтверждения урогенитального хламидиоза ряд авторов рекомендуют использовать монокомпонентные наборы для ПЦР из-за более высокой их чувствительности (100%) в отношении хламидий трахоматис.

Совет этот актуален в ситуации, когда врач подозревает наличие хламидийной инфекции у пациентки, и исследование проводится для верификации диагноза. При отсутствии специфических симптомов у женщины более целесообразно проведение комплексной ПЦР (уровень обоснованности II).

Симптомы, лечение, последствия и опасность мочеполового хламидиоза при беременности
Симптомы, лечение, последствия и опасность мочеполового хламидиоза при беременности

3. Амплификация РНК хламидий (NASBA)

Это относительно новый для России, но более информативный молекулярно-биологический метод. Суть его заключается в обнаружении в материале (мазке, соскобе, моче и так далее) цепей РНК, наличие которых сопровождает процесс построения и жизнедеятельности клетки хламидии.

РНК является транспортировщиком генетической информации от ДНК и строителем клеточных структур возбудителя путем синтеза белка.

Именно по наличию РНК в положительных результатах NASBA можно судить об эффективности проводимой антибактериальной терапии: оценивается жизнеспособность хламидий. ПЦР, основанная на обнаружении только ДНК, такой возможности не имеет.

NASBA может применяться для контроля излеченности в более ранние сроки по сравнению с ПЦР. Для контроля эффективности лечения данный метод актуален по прошествии всего 14 дней после последнего приема антибиотиков.

Лечение урогенитального хламидиоза у женщин и мужчин: препараты выбора, схемы и режимы дозирования, оценка эффективности
Лечение урогенитального хламидиоза у женщин и мужчин: препараты выбора, схемы и режимы дозирования, оценка эффективности

4. Как правильно сдавать анализ на хламидии женщинам?

Женщины анализ на хламидии методами ПЦР или NASBA могут сдать у врача-гинеколога, дерматовенеролога.

Материалами для исследования у женщин обычно служат:

  • Соскоб из уретры, влагалища, цервикального канала вне менструации. Условием является наличие в забранном материале клеток эпителия. При взятии обычного мазка, слизистого отделяемого, гноя и тому подобного, результат может быть не информативным.

Соскоб на анализ у женщин берут из наружного отверстия уретры, цервикального канала и заднего свода влагалища.

  1. 1При использовании универсального зонда: после взятия материала рабочая часть зонда отламывается и погружается в пробирку «Эппендорф» с консервирующим раствором.
  2. 2При использовании ложечки Фолькмана: ее ополаскивают в пробирке с консервирующим раствором. После этого емкость плотно закрывают, а инструмент дезинфицируют и стерилизуют.
  • Первая порция свободно выпущенной мочи. Именно в первой порции мочи сосредоточено максимальное количество слущенных эпителиальных клеток урогенитального тракта. У женщин первая порция свободно выпущенной мочи менее информативна (чувствительность 80-90%), поэтому применяется намного реже, чем соскоб. При этом нет доказательств, что утренняя моча более диагностически значима, чем, например, дневная (уровень обоснованности II).

Моча собирается пациенткой самостоятельно в чистый стерильный сухой контейнер. Для исследования достаточно порядка 10 мл мочи. Рекомендуемый период хранения  – 24 часа при соблюдении необходимого уровня температур (+2С…+8С).

5. Особенности забора материала у мужчин

Мужчины сдать анализы на хламидии могут у врача-уролога, врача-дерматовенеролога, врача-репродуктолога, андролога.

Материалами для исследования у мужчин обычно служат:

  • Отделяемое из уретры, соскоб из уретры. Подготовка пациента: перед забором материала не мочиться 2-3 часа, при обильных выделениях – 15-30 минут. При наличии обильных патологических выделений (например, гноя) рекомендуется удалить их ватным тампоном.

Процедура взятия соскоба для мужчин достаточно неприятна, порой болезненна. Соскоб забирается универсальным зондом из наружного отверстия уретры. После забора рабочая часть зонда отламывается и погружается в пробирку «Эппендорф» с консервирующей жидкостью.

  • Первая порция свободно выпущенной мочи (чувствительность выше, чем у женщин – 85-95%).
  • По показаниям для анализа на хламидии у мужчин может забираться секрет предстательной железы (при бесплодии, простатите и др. заболеваниях). Подготовка включает половое воздержание в течение 2 дней. Секрет простаты берет квалифицированный специалист после массажа предстательной железы.  Головку полового члена необходимо очистить стерильным ватным тампоном.

После завершения массажа выделившийся сок предстательной железы в количестве 0,5-1 мл собирают в сухую пробирку «Эппендорф» и плотно закрывают. При отсутствии секрета – собирают первую порцию мочи (в ней и будет содержаться весь секрет) по аналогии с обычной вышеописанной техникой.

Максимальный срок хранения всех вышеперечисленных материалов – 24 часа при строгом соблюдении температурного режима в диапазоне +2С…+8С.

Доставляется материал в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами. Для долгосрочного хранения взятый материал необходимо заморозить на срок не более 1 месяца при температуре -20С. Допускается только однократное размораживание материала.

6. Расшифровка результатов ПЦР и NASBA

  1. 1Как правило, результаты ПЦР и NASBA доступны уже через 24-36 часов, в частных лабораториях сроки готовности результатов удлинены.
  2. 2Результат может быть “положительный” (хламидии обнаружены, то есть у пациента хламидиоз) и “отрицательный” (хламидии не обнаружены, то есть у пациента мочеполового хламидиоза нет или получен ложноотрицательный результат).

При использовании методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) для грамотной интерпретации результатов необходимо соблюдать некоторые условия:

  1. 1Контрольное исследование для оценки эффективности терапии назначается не ранее, чем через 1-1,5 месяцев после окончания приема препаратов (для ПЦР), и не ранее, чем через 14 дней для NASBA. Метод ПЦР не подразумевает определение жизнеспособности обнаруженных микроорганизмов, поэтому необходимо выждать полный цикл смены эпителия.
  2. 2При сборе первой порции мочи после последнего акта мочеиспускания необходим перерыв не менее 3 часов. При обильных патологических выделениях из уретры мочу собирают через 15-20 минут после последнего акта мочеиспускания.
  3. 3Существует мнение, что изменения гормонального фона приводят к появлению в исследуемом материале ингибиторов амплификации (слизь, кровь, гной и другие компоненты). Данная ситуация наиболее актуальна в период беременности, у женщин.

Предлагалось множество способов устранения данной проблемы, но пока ни один из них не является общепризнанным:

  1. 1Ситуация с ингибиторами амплификации актуальна для небеременных женщин на 3 неделе после менструации.
  2. 2При заборе материала в первые дни после менструации есть вероятность ложноотрицательного результата за счет недостаточного накопления возбудителя в эпителии. Таким образом, оптимальный период для взятия соскоба – 4 неделя после менструации.
  3. 3Нет никакой необходимости в специальной подготовке пациентки (например, введения каких-либо препаратов, соблюдения определенной диеты) перед исследованием. На результат это не повлияет.
  4. 4Существует проблема так называемого конкурентного ингибирования. Подобная ситуация возникает при использовании лабораторией наборов для ПЦР-диагностики нескольких видов микроорганизмов. При значительном преобладании в образце какого-либо одного вида возбудителя последний может “замаскировать” наличие других видов микроорганизмов. Результат будет ложноотрицательный.
  5. 5При подозрении на ложноположительный результат возникает необходимость повторного исследования. Эта ситуация актуальна при бессимптомном течении инфекции с низкой бактериальной нагрузкой. В этом случае возможно исследование того же образца, либо забор нового, а также применение другого теста или даже метода исследования (класс рекомендаций В, уровень обоснованности II). При выявлении большого количества хламидий в исходном материале повторное исследование будет лишним и экономически необоснованным.

7. Иммуноферментный анализ

Согласно последним Федеральным рекомендациям, иммуноферментный анализ (ИФА) не применяется для диагностики неосложненного урогенитального хламидиоза (цервицитов, уретритов и др.). Такое «недоверие» обусловлено тем, что ИФА больше актуален для тяжелых, глубоких поражений хламидиями C. Trachomatis.

Метод ИФА основан на обнаружении в крови специфических антител, вырабатываемых в ответ на антигены хламидий. По сочетанию трех классов иммуноглобулинов в крови пациента можно судить о тяжести и длительности инфекционного процесса.

Как уже было сказано, данный метод при выявлении урогенитального хламидиоза имеет ряд недостатков:

  1. 1Не информативен в диагностике восходящей инфекции, цервицита и уретрита.
  2. 2Высокая частота перекрестных реакций.
  3. 3Высока частота ложноположительных реакций.
  4. 4Не подходит для контроля излеченности после проведенной антибактериальной терапии, так как неизвестно время существования в крови специфических антител;
  5. 5Позволяет диагностировать преимущественно глубокие поражения, например, врожденный хламидиоз у новорожденных (класс рекомендаций А, уровень обоснованности I).

Для проведения ИФА используется венозная кровь пациента, взятая натощак. В защиту данного метода можно отметить:

  1. 1Его более низкую стоимость, по сравнению с ПЦР.
  2. 2Удовлетворительная специфичность порядка 90%.
  3. 3Быстрота выполнения.
  4. 4Простота забора и хранения материала.

8. Выявление хламидий в культуре клеток (на среде McCoy)

Этот метод уникален тем, что позволяет оценить не только качество проведенной терапии, но и определить чувствительность хламидий к различным группам антибактериальных препаратов.

Суть метода состоит в заражении обработанной культуры клеток забранным материалом с последующим посевом на питательную среду и инкубированием в течение двух суток. Наличие хламидий в полученных клетках определяется методом ПЦР.

Для определения чувствительности к антибиотикам в обработанную культуру клеток вносят ростовую среду с содержанием определенного антибактериального средства и инкубируют в течение 5 суток.

Эффективность препарата определяют по отсутствию или замедлению роста в определенных группах. Наличие роста свидетельствует о резистентности к добавленному в  питательную среду антибиотику.

Недостатки этого метода диагностики – длительность (7 дней) и дороговизна, поэтому в клинической практике он используется в крайне редко. Обычно показанием для его назначения служит длительная неэффективная антибактериальная терапия.

9. Экспресс-методы

За рубежом в качестве рутинных, недорогих методов выявления хламидийной инфекции используются модифицированные серологические тесты.

9.1. Тест-система Chlamidia-antigen ELISA medac

Тест-система работает по принципу твердофазного ИФА-анализа. Готовая тест-система покрыта полученными путем генной инженерии, готовыми специфическими антителами. Данные антитела связаны со специальным ферментным комплексом.

При связывании антигенов с антителами ферменты высвобождаются, появляется желто-зеленое свечение, интенсивность которого и учитывает спектрофотометр.

В отличие от распространенного ИФА, где материалом для исследования служит кровь, при использовании данной тест-системы субстратом служат мазок или соскоб, взятые у женщины, мужчины. Чувствительность этого метода – около 65-70%, а специфичность 90-100%.

Источники

  • http://1parazit.ru/hlamidioz/podrobnoe-opisanie-metodov-ptsr-i-ifa-na-hlamidii.html
  • http://testanaliz.ru/pcr-na-hlamidii
  • https://womanadvice.ru/kak-berut-pcr-na-hlamidii
  • http://SamChist.ru/o-parazitah/ifa-i-ptsr-analizyi-na-hlamidii/
  • http://parazity-info.ru/analizy/pcr-na-xlamidii/
  • https://venerbol.ru/hlamidioz/pcr-na-hlamidii-chto-ehto-takoe-analiz-dnk.html
  • http://sterilno.net/infection/stds/kak-sdavat-analiz-pcr-na-xlamidii.html

[свернуть]
Помогла статья? Оцените её
1 Звезда2 Звезды3 Звезды4 Звезды5 Звезд
Загрузка...